MT2金屬硫蛋白2ELISA試劑盒
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本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中MT2金屬硫蛋白2的含量。
實驗原理:
上海試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被MT2金屬硫蛋白2的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中MT2金屬硫蛋白2呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度
試劑盒組成:
操作步驟:
金屬硫蛋白2試劑盒方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
金屬硫蛋白2ELISA方法二 用于檢測未知抗體的間接法:
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
注意事項:
1. 正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在酶聯(lián)ELISA試劑盒中,進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚、聚、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
?。?) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:用直接ELISA檢測試劑盒法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。
公司正在出售的產(chǎn)品:
HA Protein H3N2 重組甲型流感 H3N2 (A/reassortant/IVR-155) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標(biāo)簽)
球蛋白j鏈抗體
5%蛋白電泳聚集預(yù)制膠溶液500毫升
SFRP4重組人 sFRP4 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
FGF1 Protein Mouse 重組小鼠 / 大鼠 aFGF / FGF1 蛋白
SUB1重組人 SUB1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
EDAR Protein Rat 重組大鼠 EDAR 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒 ,英文名: TGF-β1 ELISA Kit
ELISAKitCCK小鼠膽囊收縮素/腸促胰酶肽規(guī)格:48T/96T
雞N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA檢測試劑盒ChickenN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGELISAKit 96T/48T
細(xì)胞死亡活化蛋白抗體
EPHA4重組大鼠 EphA4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
NTRK1 Protein Canine 重組狗 TrkA / NTRK1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
AEG-1抗體
促甲狀腺素受體抗體
PGF重組小鼠 PIGF / PLGF 蛋白 Protein
RatInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISA試劑盒大鼠樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
humannuclearfactorofkappalightpolypeptidegeneenhancerinB-cellsinhibitorepsilon,Nfkbie人B細(xì)胞κ輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子ε(Nfkbie)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鋅指/環(huán)指蛋白1抗體 Anti-ZNRF1 WB IHC-P IHC-F IF 100ul
右心房 詢價
半胱天冬酶-3酶原抗體
單胺氧化酶系列高通量篩選熒光檢測試劑盒500
鼻病毒(RV)核測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
MT2金屬硫蛋白2ELISA試劑盒F-box蛋白相關(guān)蛋白11抗體